Инсульт и полиморфизм генов

Среди неврологических заболеваний церебральный инсульт является одной из наиболее значимых медицинских и социальных проблем в большинстве стран мира, в том числе и в Российской Федерации. Высокий уровень летальности и инвалидизации перенесших инсульт людей выводит проблему далеко за рамки чисто медицинских вопросов, делает ее социально значимой в национальном масштабе, усугубляющей сложившуюся в силу различных причин демографическую ситуацию в стране.

Исследования показали, что в абсолютном большинстве случаев (около 90%) ишемический инсульт (наиболее распространенный тип инсульта в популяции) – это мультифакториальное заболевание, в развитии которого участвуют в разнообразных и сложных комбинациях особенности образа жизни, факторы окружающей среды и индивидуальные генетические особенности (степень риска развития инсульта зависит от количества имеющихся факторов: сочетание 2 – 3 из них резко увеличивает опасность острого нарушения мозгового кровообращения [ОНМК]).

В когортных исследованиях было показано, что у пациентов, родственники которых перенесли инсульт, риск развития этого заболевания выше на 30%. К сказанному следует добавить, что влияние генетических факторов имеет большое значение даже в развитии инсульта после 70 лет.

В последние десятилетия было проведено большое количество исследований, посвященных молекулярно-генетическому анализу ишемического инсульта в различных популяциях. При этом очевидно, что нельзя говорить о доминирующей роли какого-либо одного гена. Вероятнее всего, речь идет о множестве самых разных генов, совокупное действие которых участвует в формировании так называемой полигенной предрасположенности.

Внедрение молекулярно-генетических технологий диагностики ишемических инсультов в рутинную практику позволит осуществлять персонализированную диагностику, лечение и профилактику ОНМК в группах риска, увеличивать эффективность предиктивных мер в борьбе с ишемическими инсультами.

Необходимо отметить, что непосредственным предметом поиска при выявлении ассоциативных связей являются однонуклеотидные, или точечные, замены оснований в генах (SNP), детерминирующих компоненты той или иной молекулярно-биологической системы. Замещение одного нуклеотида в одном или обоих аллелях гена обусловливает эффект мутации – снижение функциональной активности кодируемой молекулы, значительно реже возможны варианты усиления функции или же ее полного исчезновения.

Исходя из известных патогенетических механизмов развития ишемического инсульта, исследовательский поиск направлен по основным ферментно-метаболическим системам: воспалительный каскад, гемореологические реакции, оксидативный стресс, молекулярные механизмы сигнальных взаимодействий. Проведен ряд исследований для поиска новых кандидатных полиморфных вариантов, влияющих на риск развития ОНМК, а также полногеномных, включающих сотни и тысячи пациентов, для выявления ассоциации уже известных генетических маркеров сердечно-сосудистых заболеваний с возникновением инсульта. Подобный подход позволяет не только установить максимальное количество ассоциированных с инсультом мутаций, но и проследить связь ОНМК с другой соматической патологией.

Гены, предрасполагающие к ишемическому инсульту, подразделяются на категории:

Необходимо отметить, что эти категории не являются взаимоисключающими. При изучении генетической детерминированности ишемического инсульта определены гены-кандидаты, экспрессия которых в виде ферментов, гормонов, структурных или транспортных белков способствует развитию болезни.

Гены-кандидаты – предикторы ишемического инсульта:

Подробнее в статье «Генетические детерминанты ишемического инсульта» М.У. Шибилова ФГБУ «Поликлиника № 1» УД Президента РФ (журнал «Кремлевская медицина» Клинический вестник, №3, 2013 [чтать].

Однако изучение генетической детерминированности ишемического инсульта (предрасположенности к ишемическому инсульту) возможно только с учетом клинического подтипа ишемического инсульта (в чем согласны все исследователи), в связи со значительными различиями в патофизиологических процессах. Так, например, крупнейшее европейское мета-аналитическое исследование последних лет – METASTROKE (2012) – продемонстрировало наиболее сильные ассоциации с развитием атеротромботического инсульта полиморфных аллелей гена HDAC9 – гистоновой деацетилазы, фермента, ответственного за изменение организации хроматина и транскрипцию генов. Также показана взаимосвязь аллельных вариантов в структуре хромосомы 9р21 с риском атеротромботического инсульта. Описан целый ряд менее распространенных, но достоверно повышающих риск атеротромботического инсульта полиморфных вариантов. К ним относятся: тромбофилические факторы риска – тромбоцитарный гликопротеин GpIIIa, фактор свертывания крови FXIII, метилентетрагидрофолатредуктаза MTHFR (С677Т), мутации, затрагивающие гены сигнальной системы клеток – PDE4D и PON, фосфодиэстеразный механизм; изменения структуры гена аполипопротеина Е АРОЕ, ответственного за утилизацию холестерина из системного кровотока.

Подробнее о генетической детерминированности к кардиоэмболическому и лакунарному инсульту, а также об общих факторах риска ишемического инсульта в статье «Генетические предикторы ишемического инсульта: современные представления» Ковалева Е.В., Доронин Б.М., Морозов В.В., Серяпина Ю.В.; Институт химической биологии и фундаментальной медицины Сибирского отделения Российской академии наук, Новосибирск; ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет Минздрава России», Новосибирск (журнал «Фундаментальные исследования», Медицинские науки, №9, 2013) [чтать].

Но несмотря на большое количество накопленной информации о факторах генетической предрасположенности к развитию того или иного подтипа ишемического инсульта, остается не до конца ясной роль подобных генетических исследований в современной персонализированной медицине. С одной стороны, в практике имеют место хорошо зарекомендовавшие себя генетические тесты для определения риска сердечно-сосудистых заболеваний (инфаркт миокарда, фибрилляция предсердий, атеросклеротическое поражение сосудов, тромбофилии и многие другие), но, с другой стороны, эти тесты мало применимы для оценки риска развития инсульта. В общем случае неудачи их использования обусловлены многообразием и разнонаправленностью патофизиологических процессов, приводящих к ишемии головного мозга. Именно поэтому так целесообразно проведение молекулярно-генетических исследований с опорой на клинические критерии. И, несмотря на то, что для каждого подтипа ишемического инсульта уже получены сведения о факторах риска, остаются надежды обнаружить общие, фундаментальные (универсальные) генетические маркеры, позволяющие диагностировать и прогнозировать течение инсульта с разными клиническими проявлениями, а соответственно и увеличивать профилактическую ценность в группах с различной степенью риска.

В рамках поиска универсальных диагностических маркеров, позволяющих диагностировать и прогнозировать течение инсульта с разными клиническими проявлениями [исходя из патофизиологических представлений об окислительном стрессе во время сосудистой катастрофы] актуально изучение генетических маркеров патологического окислительного стресса (т.е. полиморфных вариантов генов системы окислительного стресса) в качестве предикторов сосудистых заболеваний и ишемического инсульта. Также актуальна разработка технологии рутинной диагностики, пригодной для внедрения в широкую медицинскую практику.

В зарубежной литературе есть указания на ассоциации развития ишемического инсульта и более тяжелого его течения с носительством полиморфных вариантов генов глютатион-пероксидазы GPXС599Т, гипоксия-индуцированного фактора HIF1a С1772Т, НАДФ-Н оксидазы p22phox С242Т, марганцевой супероксиддисмутазы MnSOD С47Т.

Важно отметить, что носительство данных полиморфных вариантов является фактором риска не только непосредственно ишемических инсультов, но и других заболеваний сердечно-сосудистой системы, ведущих к возникновению ОНМК.

Результаты пилотного исследования позволяют сделать вывод о достоверном повышении риска возникновения ишемического инсульта у носителей полиморфного аллеля Т гена HIF1a С1772Т. Наличие в генотипе редкого аллельного варианта HIF1a предполагает высокий риск развития ишемического инсульта, особенно при участии модифицирующих факторов риска, поэтому очевидно, что для этой категории пациентов необходимо проведение полноценных профилактических мероприятий. Кроме того, крайне важно выявление носителей молекулярно-генетических предикторов среди родственников пациента, формирование групп риска и дальнейшее наблюдение, семейное консультирование.

Важно отметить, что исследование проведено в группе пациентов с ишемическим инсультом без разделения на патофизиологические подтипы, и выявленная степень риска у носителей полиморфизма HIF1a является интегральной, вне зависимости от наличия иных факторов. Проведение молекулярно-генетического исследования у всехкатегорий пациентов с ОНМК позволяет выбрать наиболее оптимальный вид лечения, подобрать комплекс персонализированных профилактических мероприятий. Внедрение диагностики с учетом генетических – конституциональных – факторов риска востребовано в рутинной практике специалистов – неврологов, терапевтов, эндокринологов, кардиологов.

Подробнее в статье «Новый диагностический маркер ишемического инсульта» Ковалева Е.В., Морозов В.В., Серяпина Ю.В. (Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН, Новосибирск), Доронин Б.М. (ГБОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет» Минздрава России, Новосибирск); журнал «Фундаментальные исследования», Физико-химическая биология, № 7, 2015 [чтать].

ЧИТАЙТЕ ТАКЖЕ:

1. статья «К вопросу о генетических механизмах развития сосудистых заболеваний мозга» В.П. Иванов, О.В. Васильева, А.В. Полоников, Е.К. Вялых, М.А. Солодилова, Н.В. Полякова, В.В. Анцупов (Кафедра биологии, медицинской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета; Научно-исследовательская лаборатория «Генетика» Курского государственного университета; Кафедра зоологии и теории эволюции Курского государственного университета) [чтать];

2. статья «Молекулярно-генетические аспекты развития ишемического инсульта» В.В. Самохвалова; Кафедра нервных болезней с курсом неврологии ФПО, ГУ «Крымский государственный медицинскый университет им. С.И. Георгиевского», г. Симферополь (Таврический медико-биологический вестник, 2013, том 16, №1, ч.3 (61)) [чтать].

Источник

Архив журнала
/
2010
/
№1

Полиморфизмы кандидатных генов для ишемического инсульта

М. Матарин, В.М. Браун, Х. Дена, А. Бриттон, Ф.В. ДеВриезе, Т.Г. Бротт, Р.Д. Браун, Б.Б. Ворралл, Л.Д. Кеис, К.Дж. Чанок, Е.Дж. Меттер, Л. Ферручи, Д. Гэмбл, Дж.А. Харди, С.С. Рич, А. Синглетон, Дж.Ф. Мешиа

Предпосылки и цель исследования. Ишемический инсульт (ИИ) — многофакторное заболевание, что подтверждено исследованиями семей, близнецов и в моделях на животных, доказавшими влияние генетических факторов на риск его развития и прогноз. Было предложено несколько кандидатных генов для ИИ, но немногие из них были реплицированы. Мы исследовали влияние 67 кандидатных генов (369 однонуклеотидных полиморфизмов [SNPs]) на риск развития ИИ в североамериканской популяции европейского происхождения. Методы. Были проведены два независимых исследования. В первом исследовании 342 SNPs из 52 генов-кандидатов генотипировали у 307 пациентов с ИИ и у 324 пациентов контрольной группы. SNPs, для которых выявили достоверную связь с развитием ИИ, тестировали на репликацию в другой группе, состоящей из 583 пациентов с ИИ и 270 пациентов контрольной группы. Во втором исследовании изучили 212 SNPs из 62 генов-кандидатов у 710 пациентов с ИИ с разделением по типам ИИ и у 3751 пациента контрольной группы. Результаты. Ни для одного из SNPs не выявили достоверной связи с повышенным риском развития ИИ независимо от известных факторов риска после коррекции данных для проверки множественных гипотез. Выводы. Полученные результаты соответствуют предыдущим мета-анализам, в которых было показано отсутствие генетической связи вариантов вероятных кандидатных генов с риском развития ИИ. Мы предполагаем, что влияние исследованных SNPs может быть слабым или оно ограничено специфичностью исследуемой популяции или подтипами ИИ.

Литература

1. Bonita R. Epidemiology of stroke. Lancet. 1992;339:342–344.

2. Flossmann E., Schulz U.G., Rothwell P.M. Systematic review of methods and results of studies of the genetic epidemiology of ischemic stroke. Stroke. 2004;35:212–227.

3. Brown R.D., Whisnant J.P., Sicks J.D., O’Fallon W.M., Wiebers D.O.

Stroke incidence, prevalence, and survival: secular trends in Rochester, Minnesota, through 1989. Stroke. 1996;27:373–380.

4. Wang X.L., Mahaney M.C., Sim A.S., Wang J., Wang J., Blangero J., Almasy L., Badenhop R.B., Wilcken D.E. Genetic contribution of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene to plasma nitric oxide levels. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 1997;17:3147–3153.

5. Matarin M., Brown W.M., Scholz S., Simon-Sanchez J., Fung H.C., Hernandez D., Gibbs J.R., De Vrieze F.W., Crews C., Britton A., Langefeld C.D., Brott T.G., Brown R.D. Jr., Worrall B.B., Frankel M., Silliman S., Case L.D., Singleton A., Hardy J.A., Rich S.S., Meschia J.F. A genome-wide genotyping study in patients with ischaemic stroke: initial analysis and data release. Lancet Neurol. 2007;6:414–420.

6. Ikram M.A., Seshadri S., Bis J.C., Fornage M., DeStefano A.L., Aulchenko Y.S., Debette S., Lumley T., Folsom A.R., van den Herik E.G., Bos M.J., Beiser A., Cushman M., Launer L.J., Shahar E., Struchalin M., Du Y., Glazer N.L., Rosamond W.D., Rivadeneira F., Kelly-Hayes M., Lopez O.L., Coresh J., Hofman A., DeCarli C., Heckbert S.R., Koudstaal P.J., Yang Q., Smith N.L., Kase C.S., Rice K., Haritunias T., Roks G., de Kort P.L., Taylor K.D., de Lau L.M., Oostra B.A., Uitterlinen A.G., Rotter J.I., Boerwinkle E., Psaty B.M., Mosley T.H., van Duijn C.M., Breteler M.M., Longstreth W.T. Jr., Wolf P.A. Genomewide association studies of stroke. N Engl J Med. 2009;360:1718–1728.

7. The World Health Organization MONICA Project (monitoring trends and determinants in cardiovascular disease): a major international collaboration. WHO MONICA Project Principal Investigators. J Clin Epidemiol. 1988;41:105–114.

8. Meschia J.F., Brott T.G., Brown R.D. Jr., Crook R.J., Frankel M., Hardy J., Merino J.G., Rich S.S., Silliman S., Worrall B.B.; Ischemic Stroke Genetics Study. The Ischemic Stroke Genetics Study (ISGS) Protocol. BMC Neurol. 2003;3:4.

9. Meschia J.F., Brown R.D. Jr., Brott T.G., Chukwudelunzu F.E., Hardy J., Rich S.S. The Siblings With Ischemic Stroke Study (SWISS) Protocol. BMC Med Genet. 2002;3:1.

10. Meschia J.F., Barrett K.M., Chukwudelunzu F., Brown W.M., Case L.D., Kissela B.M., Brown R.D. Jr., Brott T.G., Olson T.S., Rich S.S., Silliman S., Worrall B.B.; Siblings with Ischemic Stroke Study (SWISS) Investigators. Interobserver agreement in the Trial of Org 10172 in Acute Stroke Treatment classification of stroke based on retrospective medical record review. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2006;15:266–272.

11. Folstein M.F., Folstein S.E., McHugh P.R. ‘Mini-mental state.’ A practical method for grading the cognitive state of patients for the clinician. J Psychiatr Res. 1975;12:189–198.

12. Wigginton J.E., Cutler D.J., Abecasis G.R. A note on exact tests of Hardy-Weinberg equilibrium. Am J Hum Genet. 2005;76:887–893.

13. Berger K., Stogbauer F., Stoll M., Wellmann J., Huge A., Cheng S., Kessler C., John U., Assmann G., Ringelstein E.B., Funke H. The glu298asp polymorphism in the nitric oxide synthase 3 gene is associated with the risk of ischemic stroke in two large independent case– control studies. Hum Genet. 2007;121:169–178.

14. Wang X., Cheng S., Brophy V.H., Erlich H.A., Mannhalter C., Berger K., Lalouschek W., Browner W.S., Shi Y., Ringelstein E.B., Kessler C., Luedemann J., Lindpaintner K., Liu L., Ridker P.M., Zee R.Y., Cook N.R.; RMS Stroke SNP Consortium. A meta-analysis of candidate gene polymorphisms and ischemic stroke in 6 study populations: association of lymphotoxin-alpha in nonhypertensive patients. Stroke. 2009;40:683–695.

15. Casas J.P., Hingorani A.D., Bautista L.E., Sharma P. Meta-analysis of genetic studies in ischemic stroke: thirty-two genes involving approximately 18 000 cases and 58 000 controls. Arch Neurol. 2004;61:1652–1661.

16. Maguire J.M., Thakkinstian A., Sturm J., Levi C., Lincz L., Parsons M., Whyte S., Attia J. Polymorphisms in platelet glycoprotein 1balpha and factor VII and risk of ischemic stroke: a meta-analysis. Stroke. 2008;39:1710–1716.

17. Lalouschek W., Endler G., Schillinger M., Hsieh K., Lang W., Cheng S., Bauer P., Wagner O., Mannhalter C. Candidate genetic risk factors of stroke: results of a multilocus genotyping assay. Clin Chem. 2007;53:600–605.

18. Tsantes A.E., Nikolopoulos G.K., Bagos P.G., Tsiara C.G., Kapsimali V., Travlou A., Vaiopoulos G. Plasminogen activator inhibitor-1 4G/5G polymorphism and risk of ischemic stroke: a meta-analysis. Blood Coagul Fibrinolysis. 2007;18:497–504.

19. Pereira T.V., Rudnicki M., Franco R.F., Pereira A.C., Krieger J.E. Effect of the G-308A polymorphism of the tumor necrosis factor alpha gene on the risk of ischemic heart disease and ischemic stroke: a metaanalysis. Am Heart J. 2007;153:821–830.

20. Nikolopoulos G.K., Tsantes A.E., Bagos P.G., Travlou A., Vaiopoulos G.Integrin, alpha 2 gene C807T polymorphism and risk of ischemic stroke: a meta-analysis. Thromb Res. 2007;119:501–510.

21. Attia J., Thakkinstian A., Wang Y., Lincz L., Parsons M., Sturm J., McGettigan P., Scott R., Meldrum C., Levi C. The PAI-1 4G/5G gene polymorphism and ischemic stroke: an association study and metaanalysis. J Stroke Cerebrovasc Dis. 2007;16:173–179.

22. Kawas C., Gray S., Brookmeyer R., Fozard J., Zonderman A. Agespecific incidence rates of Alzheimer’s disease: the Baltimore Longitudinal Study of Aging. Neurology. 2000;54:2072–2077.

23. Hunter D.J., Kraft P., Jacobs K.B., Cox D.G., Yeager M., Hankinson S.E., Wacholder S., Wang Z., Welch R., Hutchinson A., Wang J., Yu K., Chatterjee N., Orr N., Willett W.C., Colditz G.A., Ziegler R.G., Berg C.D., Buys S.S., McCarty C.A., Feigelson H.S., Calle E.E., Thun M.J., Hayes R.B., Tucker M., Gerhard D.S., Fraumeni J.F. Jr., Hoover R.N., Thomas G., Chanock S.J. A genome-wide association study identifies alleles in FGFR2 associated with risk of sporadic postmenopausal breast cancer. Nat Genet. 2007;39:870–874.

24. Newton-Cheh C., Hirschhorn J.N. Genetic association studies of complex traits: design and analysis issues. Mutat Res. 2005;573:54–69.

Похожие статьи

Внутривенный тромболизис при окклюзии основной артерии: предикторы реканализации и исхода
Разработка клинической шкалы (A2DS2) для прогнозирования риска развития пневмонии при остром ишемическом инсульте
Связь между временем onset-to-door и временем door-to-thrombolysis. Обобщенный анализ работы 10 специализированных центров по лечению инсульта
Ранняя геморрагическая трансформация в очаге инфаркта головного мозга: частота развития, прогностические факторы и влияние на клинические исходы. Результаты проспективного мультицентрового исследования
Ранние биомаркеры клинико-диффузионного несоответствия при остром ишемическом инсульте

Источник

Цереброваскулярные заболевания представляют собой одну из важнейших проблем в клинической неврологии. Половина всех инсультов приходится на трудоспособный возраст, и лишь около 20% выживших больных могут вернуться к прежней работе [1, 2]. Не вызывает сомнения, что одной из основных причин возникновения ишемического инсульта (ИИ) является тромбоз церебральных артерий. Этот факт привлекает особое внимание к изучению генов, которые связаны с системой свертывания крови.

Гликопротеин Ib (GPIb) — тромбоцитарный белок, который входит в состав гликопротеинового комплекса GPIb/IX/V, функционирующего как рецептор для фактора фон Виллебранда (ФВ). Полиморфизм -5Т/С гена GP1BA [3] приводит к увеличению плотности рецепторного комплекса GPIb/IX/V на мембранах тромбоцитов [4, 5], что в свою очередь может способствовать развитию тромбообразования. Результаты ряда исследований указывают на возможную ассоциацию полиморфизма -5Т/С гена GP1BA с риском развития инфаркта миокарда и ИИ [6—8], в то время как другие работы показывают негативные результаты [9, 10].

Ген F2 кодирует коагулирующий фактор II (протромбин) — основной компонент свертывающей системы крови. S. Poort и соавт. [11] описали полиморфный локус G20210A [12], который приводит к повышению уровня протромбина в крови в 1,5—2 раза по сравнению с нормальными значениями [13]. В ряде исследований [12, 14] была выявлена ассоциация G20210A полиморфизма гена F2 с риском развития тромбоза вен нижних конечностей. В отношении данного полиморфного локуса и риска развития ИИ имеются достаточно противоречивые данные [15—18].

Коагулирующий фактор V (FV) секретируется в результате активации тромбоцитов. В гене F5 присутствует полиморфный локус G1691A (мутация Лейдена), ассоциированный с устойчивостью к активированному протеину С и являющийся причиной гиперкоагуляционной активности ФВ, что может приводить к развитию тромбозов. Только несколько исследований случай—контроль обнаружили ассоциацию между мутацией и риском развития ИИ или транзиторной ишемической атаки (ТИА) [19—21], в то время как в других работах данной ассоциации не выявлено [22—24].

Результаты исследований по изучению влияния полиморфных вариантов генов GP1BA, F2, F5 на риск развития ИИ не являются однозначными [6—24]. Возможно, это связано со значительными межэтническими различиями в распределении генотипов и аллелей однонуклеотидных полиморфизмов генов в разных популяциях.

Цель настоящего исследования — изучение влияния полиморфных вариантов генов системы гемостаза на риск развития ИИ у пациентов славянской популяции в возрасте до 50 лет.

Обследовали 92 пациентов (19 женщин, 73 мужчины) в возрасте от 18 до 50 лет (средний возраст 42,2±6,7 года) с ИИ (основная группа), проходивших лечение в неврологических клиниках РНИМУ им. Н.И. Пирогова (ГКБ № 31, ГКБ № 20 Москвы).

Критерии включения в исследование: атеротромботический, лакунарный и криптогенный ИИ или ТИА; принадлежность к русскому этносу; подписание больным или его ближайшими родственниками информированного согласия. Критерии исключения: неславянское происхождения; геморрагический, кардиоэмболический ИИ и ИИ другой известной этиологии.

Контрольную группу составили 90 здоровых (45 мужчин, 45 женщин) этнически русских молодого возраста (средний возраст 26,2±3,9 года), подписавших информированное согласия на участие в исследовании (см. рисунок). Инсульт и полиморфизм генов Распределение пациентов по полу и возрасту. По оси ординат — соотношение мужчин и женщин (%).

Ишемический характер инсульта подтверждался результатами нейровизуализации. Патогенетический подтип ИИ, согласно критериям TOAST [25], устанавливался на основании анамнеза развития заболевания, оценки соматического и неврологического статусов, данных клинико-инструментальных методов исследования. У всех пациентов проводился анализ семейного и индивидуального анамнеза с уточнением всех возможных факторов риска.

При поступлении в стационар в 1—2-е сутки заболевания проводились исследование биохимический анализ крови с определением уровня холестерина, триглицеридов, липопротеинов высокой, низкой и очень низкой плотности с целью выявления дислипидемии; определение уровня глюкозы крови; развернутая коагулограмма и агрегатограмма для оценки состояния реологических свойств крови; дуплексное сканирование магистральных артерий головы (МАГ) и транскраниальное дуплексное сканирование артерий основания головного мозга для выявления патологии экстра- и интракраниальных артерий.

За время пребывания в стационаре в плановом порядке проводили оральный глюкозотолерантный тест для выявления сахарного диабета или нарушения толерантности к углеводам; обследование на антифосфолипидный синдром, на наличие системных заболеваний; анализ крови на содержание гомоцистеина; трансторакальную эхокардиографию; по показаниям, для исключения парадоксальной эмболии, — трансэзофагеальную эхокардиографию.

Генетический анализ был проведен на базе отдела молекулярных основ генетики человека ИМГ РАН. Для проведения анализа использовали препараты ДНК, полученные из 3 мл венозной крови. Выделение геномной ДНК проводили с использованием набора AxyPrep Blood Genomic DNA Midiprep Kit («Axygen», США) согласно рекомендациям производителя.

Полиморфные аллели генов GP1BA, F2, F5 исследовали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с использованием технологии TaqMan (табл. 1). Инсульт и полиморфизм генов Таблица 1. Метод ПЦР в режиме реального времени: исследуемые полиморфные варианты генов, праймеры, условия амплификации ПЦР проводили на амплификаторе StepOnePlus («Applied Biosystems», США).

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием пакета программ IBM SPSS Statistics version 19, программного обеспечения MS Excel 2000 («Microsoft», США) и программы GraphPad InStat3, с помощью которой определяли величину критерия χ2 и показателя относительного риска (ОР). Достоверными считали значения при p<0,05.

В основной группе 90 пациентов перенесли ИИ, у 2 больных отмечалась ТИА. Основные клинические особенности пациентов и распределение по патогенетическим вариантам представлены в табл. 2. Инсульт и полиморфизм генов Таблица 2. Клиническая характеристика пациентов с ИИ, распределение по факторам риска и патогенетическим подтипам Полиморфизм гена GP1BA был определен у 92 больных основной группы и у 89 здоровых (контрольная группа). Полиморфизм гена F2 был выявлен у 91 пациента основной группы и у 89 здоровых. Полиморфизм гена F5 (мутация Лейдена) определен у 91 пациента с ИИ и у 90 здоровых. Частоту генотипов и аллелей сравнивали между группами больных с ИИ и контрольной выборкой, а также между больными с атеротромботическим, лакунарным, криптогенным патогенетическими подтипами ИИ и ИИ, вызванным тромбозом МАГ, и контрольной выборкой. Кроме того, были проанализированы выборки больных с ИИ и контрольной группой, дифференцированные по полу. Результаты представлены в табл. 3, 4. Инсульт и полиморфизм генов Таблица 4. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей по (-5)T>C (Kozak) GP1BA, c.20210G>A F2, c.1691G>A F5 полиморфным локусам у мужчин Таблица 3. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей по (-5)T>C (Kozak) GP1BA, c.20210G>A F2, c.1691G>A F5 полиморфным локусам в группах пациентов и контроля

Анализ полиморфизма -5Т/С гена GP1BA показал статистически достоверное различие в распределении частот генотипов и аллелей по данному полиморфному локусу между больными и контрольной группой. В группе пациентов с ИИ достоверно чаще встречались аллель С (p=0,02; ОР=2,0; 95% ДИ 1,1—3,6) и содержащие его генотипы С/С и С/Т (p=0,04; ОР=2,0; 95% ДИ 1,04—3,8).

При анализе с учетом пола у мужчин по сравнению с контролем имело место статистически достоверное повышение встречаемости аллеля С (p=0,02) и генотипов С/С и С/Т (р=0,03). Риск развития ИИ у молодых мужчин с генотипами С/С и С/Т был увеличен более чем в 2 раза (p=0,03; ОР=2,7; 95% ДИ 1,1—6,5). Достоверных различий в распределении частот генотипов и аллелей между больными и контролем у женщин получено не было (р>0,05). Таким образом, генотипы -5С/С и -5Т/С ассоциированы с развитием ИИ у мужчин в возрасте до 50 лет. Аллель С является фактором повышенного риска развития ИИ у мужчин в молодом возрасте, в то время как у женщин этот аллель и содержащие его генотипы не являются фактором риска развития ИИ.

Анализ полиморфизма G20210A гена F2 и полиморфизма G1691A гена F5 не выявил достоверных различий в распределении частот генотипов и аллелей между пациентами с ИИ и контрольной группой (см. табл. 3). Также не было обнаружено различий в распределении частот генотипов и аллелей при анализе выборок с учетом пола (см. табл. 4).

На следующем этапе проводили анализ между пациентами, относящимися к различным патогенетическим подтипам ИИ, и контрольной группой. С учетом полученных данных по полиморфизму -5Т/С гена GP1BA, которые показали ассоциацию с ИИ у мужчин, этот полиморфный локус анализировали только в мужской популяции. Таким образом, при анализе распределения генотипов и аллелей полиморфизма -5Т/С гена GP1BA, полиморфизма G1691A гена F5, полиморфизма G20210A гена F2 у пациентов с атеротромботическим и криптогенным ИИ не выявили ассоциации ни с одним из изучаемых полиморфных локусов. Различия в распределении частот генотипов и аллелей между группами больных и контролем были статистически недостоверны.

При анализе пациентов с лакунарным ИИ установлено наличие ассоциации полиморфизма -5Т/С гена GP1BA и полиморфизма G1691A гена F5 с данным вариантом ИИ (табл. 5). Инсульт и полиморфизм генов Таблица 5. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей по (-5)T>C (Kozak) GP1BA, c.20210G>A F2, c.1691G>A F5 полиморфным локусам у пациентов с лакунарным ИИ и в контрольной группе

У пациентов наблюдалась более частая встречаемость аллеля С (p=0,02) и связанных с ним генотипов Т/С и С/С (p=0,03) гена GP1BA по сравнению с контрольной группой. Риск развития лакунарного инсульта у носителей генотипов Т/С и С/С был повышен более чем в 3 раза (OР=3,6; 95% ДИ 1,2—10,7). Также отмечалось наличие более частой распространенности генотипа GA и аллеля A по полиморфизму G1691A гена F5 у пациентов с лакунарным ИИ по сравнению с контрольной группой (для генотипов p=0,038; OР=11,1; 95% ДИ 1,11—111,88), для аллелей (p=0,039; ОР=10,5; 95% ДИ 1,07—103,46).

Статистически достоверных различий в распределении частот генотипов и аллелей по полиморфному локусу G20210A гена F2 между пациентами с лакунарным ИИ и контрольной группой получено не было.

Отдельно была проанализирована группа пациентов с ИИ, у которых был выявлен тромбоз каротидных или позвоночных артерий и исключен кардиоэмболический генез ИИ. У 21 больного — 18 (85,7%) мужчин и 3 (14,3%) женщин — имел место тромбоз МАГ (14 пациентов с атеротромботическим ИИ и 7 — с криптогенным ИИ) (табл. 6). Инсульт и полиморфизм генов Таблица 6. Сравнительный анализ частот генотипов и аллелей по (-5)T>C (Kozak) GP1BA, c.20210G>A F2, c.1691G>A F5 полиморфным локусам у пациентов с ИИ, вызванным тромбозом МАГ, и в контрольной группе В группе этих больных достоверно чаще встречались генотипы С/С и С/Т гена GP1BA по сравнению с контрольной группой (p=0,001; OР=5,3; 95% ДИ 1,9—14,4), а также аллель C (p=0,0007; OР=4,2; 95% ДИ 1,9—9,0).

Анализ полиморфизма G20210A гена F2 у пациентов с тромбозами МАГ показал статистически достоверное различие в распространенности генотипов (p=0,01; OР=10,9; 95% ДИ 1,8—64,5) и аллелей (p=0,01; OР=9,8; 95% ДИ 1,7—55,4) у пациентов с тромбозами МАГ по сравнению с контролем.

В результате проведенного исследования можно сделать вывод, что полиморфизм -5Т/С гена GP1BA и полиморфизм G20210A гена F2 ассоциированы с риском развития ИИ, вызванного тромбозом МАГ.

При проведении молекулярно-генетического анализа полиморфизма G1691A гена F5 у пациентов с выявленными тромбозами МАГ и группой контроля статистически значимых различий в распределении частот генотипов получено не было (p=0,33).

Таким образом, все данные, полученные при анализе наличия ассоциации полиморфизма -5Т/С гена GP1BA с ИИ, указывают на то, что Т/С-полиморфизм гена GP1BA ассоциирован с развитием ИИ у мужчин молодого возраста. Фактором повышенного риска развития ИИ является аллель -5С и генотипы, его содержащие: -5Т/С и -5С/С. Кроме того, генотипы С/С и С/Т по полиморфизму -5Т/С гена GP1BA ассоциированы с развитием ИИ, вызванного тромбозом МАГ, у пациентов в возрасте до 50 лет. В данной группе пациентов отмечалось наличие выраженной тенденции к более частой встречаемости аллеля -5С и генотипов -5Т/С и -5С/С у больных с лакунарным подтипом И.И. Полученные результаты позволяют предположить, что этот полиморфный локус реализует свой протромбогенный эффект как на уровне МАГ, так и на микроциркуляторном русле, потенцируя тромбоз как крупных, так и мелких сосудов. Необходимо отметить, что отсутствие статистически достоверных ассоциаций исследуемых полиморфизмов генов с ИИ у женщин молодого возраста в настоящем исследовании связано, возможно, с небольшим числом пациентов данной подгруппы.

Результаты исследования подтверждают данные большинства метаанализов [6, 26, 27], проведенных в других странах, которые выявили ассоциацию полиморфизма -5Т/С гена GP1BA с риском развития И.И. Кроме того, они объясняют негативные результаты исследования M. Frank и соавт. [9], которое было проведено у женщин в возрасте от 18 до 44 лет с ИИ.

В нашем исследовании у женщин в возрасте от 18 до 50 лет также не было выявлено статистически значимой ассоциации с полиморфизмом -5Т/С гена GP1BA. Полученные данные могут свидетельствовать о том, что этот полиморфный локус играет роль в развитии ИИ у мужчин молодого возраста, принадлежащих к различным этническим группам.

В литературе имеются достаточно противоречивые данные об ассоциации полиморфизма G1691A гена F5 с повышенным риском развития инсульта. Так, метаанализы А. Wu и G. Tsongalis [28] и J. Casas и соавт. [29] подтверждают положительные ассоциации между данным полиморфизмом в гене F5 с ИИ, однако при этом авторы указывают на высокую гетерогенность исследований, объединенных в этих метаанализах. Другие исследования, выявившие положительные ассоциации полиморфизма G1691A гена F5 и ИИ, проводились либо на выборках небольшого объема, либо на достаточно фенотипически специализированных выборках [16—18]. Широкомасштабное мультилокусное исследование, проведенное W. Lalouschek и соавт. [30], и исследование GEOS [24] не подтвердили наличия ассоциаций полиморфизма G1691A гена F5 с риском развития ИИ. В настоящем исследовании была выявлена ассоциация между данным полиморфизмом и риском лакунарного ИИ в возрастной группе до 50 лет. Учитывая, что число пациентов данной подгруппы невелико, необходимо дальнейшее исследование для уточнения статистической достоверности.

Большинство исследований в отношении полиморфизма G20210A гена F2 не выявило ассоциации с риском развития ИИ [16, 18, 30]. Однако результаты исследовании GEOS [15] показали ассоциацию данного полиморфного локуса с ИИ у пациентов молодого возраста. В настоящем исследовании также были получены данные, что полиморфизм G20210A гена F2 не ассоциирован с риском развития ИИ у пациентов в возрасте до 50 лет. Тем не менее при анализе подгруппы пациентов с тромбозом МАГ наблюдались статистически достоверные различия в распределении частот генотипов и аллелей по сравнению с контрольной группой. Таким образом, можно сделать вывод, что данный полиморфный локус ассоциирован с риском развития ИИ, вызванного тромбозом МАГ.

У 46 (50%) из 92 больных был обнаружен хотя бы один из изученных протромбогенных полиморфных локусов. А 3 больных оказались носителями сочетания двух различных неблагоприятных аллелей в изученных генах. Наличие нескольких протромбогенных полиморфизмов оказывало аддитивный эффект и приводило к более раннему развитию ИИ либо к возникновению рецидивов заболевания у этих больных.

Результаты проведенного исследования подтвердили важную роль наследственного фактора в развитии И.И. Выявление генетических маркеров риска цереброваскулярной патологии позволяет расширить возможности ее первичной профилактики, разработать комплексные превентивные методы обследования и лечения лиц из групп риска.

ИИ нельзя рассматривать как однородную группу для оценки генетических факторов риска. Имеет смысл проводить анализ с учетом патогенетического варианта ИИ, что позволяет сделать выборку более однообразной. А у пациентов молодого возраст с учетом гормональных особенностей необходимо учитывать и пол пациентов. Дальнейшие исследования в этом направлении позволят более четко определить генетические факторы риска ишемического инсульта в разных возрастных группах.

По результатам настоящего исследования были сделаны следующие выводы:

1. Анализ полиморфного локуса -5Т/С гена GP1BA показал, что данный полиморфизм ассоциирован с развитием ИИ у мужчин молодого возраста. Фактором повышенного риска развития инсульта являлся аллель –5С и генотипы его содержащие: -5Т/С и -5С/С (p=0,04; ОР=2,0; 95% ДИ 1,04—3,8]). Также у мужчин аллель -5С и генотипы -5Т/С и -5С/С являются фактором повышенного риска лакунарного ИИ (p=0,02; OР=3,6; 95% ДИ 1,2—10,7). Кроме того, у пациентов в возрасте до 50 лет генотипы -5С/С и -5С/Т ассоциированы с развитием ИИ, вызванного тромбозом МАГ (p=0,001; OР=5,3; ДИ 1,9—14,4).

2. Анализ полиморфных локусов G1691A гена F5 и G20210A гена F2 показал, что аллель 1691A и генотип G1691A гена F5 ассоциированы с развитием лакунарного ИИ у пациентов молодого возраста (p=0,038; ОР=11,1; 95% ДИ 1,11—111,88), а аллель 20210A и генотип G20210A гена F2 ассоциированы с повышенным риском развития ИИ в результате тромбоза МАГ (p=0,01; OР=10,9; 95% ДИ 1,8—64,5) и не влияют на риск развития других патогенетических подтипов ИИ (p>0,05).

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

*e-mail: ekovita@mail.ru

Источник